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CH-1R株PRRSV活疫苗对HP-PRRSV的临床保护调查

大北农疫苗2020-02-24 15:56:54

摘要

经临床症状、病理变化、实验室检测结合测序分析,诊断河南某规模猪场疫情主要由HP-PRRSV(ORF5基因同源性与JXA1株相近)感染所致,于2015年9月将进口PRRSV疫苗更换为“蓝定抗”(CH-1R株PRRSV活疫苗,福州大北农生物技术有限公司提供)。对免疫前后猪场的临床症状及生产数据做对比分析,以评估疫苗的免疫效果。结果显示,免疫“蓝定抗”后,母猪繁殖障碍问题明显改善,产房、保育成活率显著提升,至2016年12月,一直保持较高的生产水平。


关键词

PRRSV;妊娠母猪;PRRSV疫苗;安全性



据报道,目前我国猪场PRRSV的感染率接近100%。


在生产实践中,许多猪场尽管正在遭受PRRS的困扰并导致巨大的经济损失,但大多数猪场仍然选择维持现状,不敢改变。究其因,主要在于害怕即使更换疫苗也难以获得改善,反而可能使猪场原有问题恶化。因此,PRRSV活疫苗的安全性及有效性成为行业关注的焦点,“蓝定抗”是一种辅以专用佐剂的PRRSV活疫苗(CH-1R株),为了解其临床免疫的安全性和有效性,开展了本次临床调查。



1 猪场基本概况


该场位于河南省南阳市,能繁母猪存栏约1200头,分别由基础母猪存栏800头和400头的两个分场组成。每个分场均为自繁自养、单点式生产模式。妊娠母猪采用自动喂料系统,保育、育肥阶段自动料槽饲喂粪便处理方式在分娩舍、妊娠母猪舍为水泡粪模式,在保育和育肥舍为水清粪模式。母猪群PRRSV疫苗免疫某进口厂家的经典毒株活疫苗,一年普免4次,剂量1头份/次;仔猪群PRRSV疫苗在2周龄左右免疫,为某国产厂家的经典毒株活疫苗,免疫剂量1头份/头猪。


2 猪场存在的问题及诊断

2.1 临床症状

自2015年3月起母猪群泪斑现象比例较多(见图1),返情率高,据统计,2015年7月份返情率19.7%,8月份返情率24.5%。部分母猪在妊娠中后期出现流产,产弱仔、死胎以及木乃伊胎的比例均超出正常范围。


图1 妊娠母猪泪斑现象


断奶仔猪转入保育舍后呼吸障碍明显,主要表现为咳嗽、皮毛松乱以及消瘦。部分出现腹泻,拉黄绿色稀粪。保育猪患关节炎的比例增多,病程后期出现喘气、死亡(见图2)。


图2 保育猪消瘦、喘气、打堆、关节炎


2.2 病理变化

剖检病变主要在胸腔内,主要表现为胸腔积液,暴露于空气后很快呈胶冻样。可见胸腔内严重的肺部病变,肺淤血、水肿,肺脏呈花斑样(见图3)。


图3 保育猪胸腔积液、肺脏呈花斑样


2.3 实验室检测

随机选取不同母猪的新鲜流产胎儿2头,采集组织病料(肺脏、淋巴结、扁桃体、脾脏、肝脏)1份,保育发病仔猪组织病料2份,基因检测猪瘟、伪狂犬、蓝耳和圆环等病原,结果见图4、图5和表1。


同时,随机采集41份母猪血清,进行PRRSV抗体检测,检测结果见表2。


2.3.1 抗原检测结果

检测结果显示(见表1),该场除变异PRRSV抗原呈阳性外(根据NSP2基因设计引物,可区分经典株和变异株),流产胎儿猪瘟病毒呈现弱阳性;同时检测到圆环病毒抗原。


表1 病原基因检测结果,病料1、病料2均为发病保育猪


图4 猪蓝耳病与猪瘟病原基因检测凝胶电泳图

图5 猪伪狂犬病与猪圆环病毒病病原基因检测凝胶电泳图


2.3.2 抗体检测结果

根据抗体检测结果统计,PRRS 抗体S/P平均值2.1,S/P大于2.5比例为24.4%,离散度85.9%,提示母猪群PRRS处于活跃状态。

表2 母猪群PRRSV抗体检测结果


2.3.3 测序结果及同源性分析

将这2份阳性样品编号分别为HeN1508-1、HeN1508-2,经ORF5扩增后测序得到2个基因片段,利用DNAstar中的Meg Align对上述两个基因片段和参考毒株的ORF5基因进行序列比对和同源性分析,并利用MEGA 4构建进化树,见图6、图7。


图6 两株ORF5基因核苷酸序列同源性分析


图7 ORF5基因序列系统发育进化树


由图6、图7可知,两个样本之间的ORF5基因片段同源性在99.7%以上,与JXA1株的同源性在99.6%,与HUN4的同源性在99.5%,与CH-1a株的同源性在94.8%,表明来自于HP-PRRSV毒株。


2.4 诊断

综合临床症状、病理变化与实验室检测,推测该场主要由HP-PRRSV感染所致,并伴有副猪嗜血杆菌、链球菌等细菌的继发感染。


2.5 免疫方案调整

每头母猪接种“蓝定抗”2头份,深层肌肉注射,间隔25d后加强免疫1头份,之后按4次/年,1头份/次。同时挑选妊娠40 d左右的母猪50头,固定耳号,以进行持续临床观察。仔猪3-5日龄免疫“蓝定抗”0.5头份/头,35~40日龄加强免疫1头份/头。


免疫“蓝定抗”的安全性及有效性调查

3.1 安全性试验评估指标

疫苗接种后连续跟踪7d,观察并记录疫苗注射部位吸收情况及母猪的体温、采食、精神状况、粪便及流产情况。


3.2 免疫有效性评估指标

统计分析免疫“蓝定抗”前后该场的母猪流产率、窝均健仔数、哺乳仔猪及保育仔猪成活率等生产数据的对比,以评估疫苗免疫的有效性。


4 结果

4.1 安全性调查结果

安全性统计结果可知,1200多头母猪首次普免“蓝定抗”后,出现发烧(肛温>39.5℃)或精神沉郁或减料等临床症状的猪只共6只,约占免疫猪群比例的0.5%,未出现流产现象。

表3 母猪免疫“蓝定抗”后跟踪观察结果

9月8日首次免“蓝定抗”前3d和后7d,测定并记录了50头免疫母猪的体温变化情况。其平均体温变化结果见图8。


备注:“A”表示:发烧或精神沉郁或减料;“B”表示:流产和“A”


图8 首免蓝定抗后怀孕母猪平均体温变化曲线


4.2 有效性试验结果

4.2.1 母猪返情率与流产率


图9 免疫“蓝定抗”前后母猪返情率与流产率线性图


统计结果显示,免疫“蓝定抗”前(2015年9月前)母猪返情率18.5%,流产率6.4%,免疫后(2015年10月至2016年12月)返情率5.5%,流产率1.8%,返情率降低了13%,流产率降低了4.6%,差异显著。


4.2.2 死胎率与窝均健仔数

图10 免疫“蓝定抗”前后死胎率与窝均健仔数线性图


统计结果显示,免疫前(2015年9月前)死胎率14.73%,窝均健仔数9.36头,免疫后(2015年10月至2016年12月)死胎率8.75%,窝均健仔数10.54头。死胎率降低了5.8%,窝均健仔数提高了1.18头。


4.2.3 哺乳仔猪与保育猪成活率


图11 免疫“蓝定抗”前后哺乳仔猪与保育猪成活率线性图


统计结果显示,免疫前(2015年9月前)哺乳仔猪成活率88.6%,保育猪成活率86.8%,免疫后(2015年10月至2016年12月)哺乳仔猪成活率93.4%,保育猪成活率95.3%,哺乳仔猪成活率提高4.8%,保育猪成活率提高了8.5%,差异显著。


讨论与分析

5.1 实验室检测结果显示

该场除变异PRRSV基因检测呈阳性外,流产胎儿猪瘟病毒呈弱阳性;病料2和流产胎儿猪圆环病毒均呈阳性。因此,猪场还要注重猪瘟的防控,这在之后的方案中我们也向农场主提出了建议。由于猪圆环病毒感染普遍,且感染不一定致病,进一步诊断可能需通过定量检测来建立界定数量级别的感染。所以,结合临床症状、剖检变化、实验室检测诊断其主要病因是由HP-PRRSV感染所致。


5.2 由母猪抗体检测可知

该场属于PRRSV活跃场,母猪免疫“蓝定抗”后发生临床副反应的比例仅占0.5%,且未发生流产现象;同时参考2015年9月8号首免后及到2015年低,该场的窝均健仔数呈现稳定增长,推断免疫“蓝定抗”后其种毒不会出现垂直传播问题。


所以更换PRRSV疫苗时,以“蓝定抗”免疫母猪具有良好的安全性。


5.3 由该场病史及PRRSV基因序列分析可知

该场存在的母猪繁殖障碍问题及产房、保育成活率低等问题主要由HP-PRRSV感染导致,猪群免疫“蓝定抗”后,母猪的繁殖障碍问题得以明显改善,产房及保育成活率得以提高,且在较长时间里保持相对较高的水平。


“蓝定抗”免疫后对HP-PRRSV感染能够提供良好的临床保护效果。



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